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固相萃取的十個(gè)技巧

更新時(shí)間:2024-04-11瀏覽:618次

固相萃取的十個(gè)技巧

1. 了解您的化合物!

被分析化合物的性質(zhì)會(huì)對(duì)哪種類型的SPE產(chǎn)生強(qiáng)烈反應(yīng)。查看我們SPE 指南。 其中兩個(gè)最重要的值是目標(biāo)分析物的 pKa Log P

pKa = 分析物半電離和半非電離的點(diǎn)。

Log P = 化合物疏水性的量度。

2. 優(yōu)化負(fù)載pH

pH值對(duì)任何SPE方法都有很大影響,可用于優(yōu)化SPE產(chǎn)品上化合物的保留。

例如,反相法調(diào)節(jié)pH值以中和分析物上的任何電荷。這將使它們更具疏水性,更好地改善與樹脂的相互作用。對(duì)于酸性化合物,將 pH 值調(diào)整為 2 個(gè)低于 pKa pH 單位,對(duì)于堿性化合物,將 pH 值調(diào)整為 2 個(gè)高于 pKa pH 值。

3. 提高洗滌和洗脫強(qiáng)度

    使用混合模式或反相 SPE 產(chǎn)品時(shí),可以調(diào)整洗滌和洗脫強(qiáng)度以獲得干凈的提取物。Log P 是一個(gè)很好的屬性,可以幫助決定設(shè)置這些內(nèi)容。

高對(duì)數(shù) P - 在洗滌步驟中使用更強(qiáng)的有機(jī)強(qiáng)度。

低對(duì)數(shù)P - 降低洗脫溶劑的有機(jī)強(qiáng)度,以抑制疏水干擾,同時(shí)仍能洗脫所選的分析物。

4.使用新鮮標(biāo)樣!

一些分析物容易受到熱和光的降解,長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)會(huì)從溶液中析出。這將影響校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)和

運(yùn)行的恢復(fù)值。在開始之前,先用新鮮標(biāo)樣開始您的程序。

5. 了解您的吸附劑!

找出您正在使用的吸附劑的 pKa 并將其與您的分析物 pKa 一起使用,以在負(fù)載和洗滌步驟中調(diào)節(jié)溶液的 pH 值,而無(wú)需去離子化合物和樹脂(僅限弱離子樹脂)。

6. 吸附劑調(diào)理

現(xiàn)在您已經(jīng)知道了吸附劑的pKa(步驟5),您的吸附劑床就可以被激活,并準(zhǔn)備通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)合分析物。在大多數(shù)二氧化硅基SPE吸附劑中,二氧化硅與通常平放在顆粒表面的功能化部分鍵合。

調(diào)節(jié)步驟(使用水溶性有機(jī)溶劑,例如MeOH)使這些鍵合官能團(tuán)“站立"在顆粒頂部,為目標(biāo)分析物提供最大的表面積來(lái)相互作用/結(jié)合。如果吸附劑是可水潤(rùn)濕的,則可能不需要此步驟,但它可以通過(guò)對(duì)吸附劑床進(jìn)行溶劑清洗來(lái)提高提取物的清潔度。

7. 流速很重要

流速對(duì)于成功的反相SPE工作流程非常重要。保留機(jī)制在很大程度上依賴于吸附劑和目標(biāo)分析物之間的范德華相互作用力。SPE過(guò)程中的快速流速會(huì)降低目標(biāo)分析物與吸附劑介質(zhì)正確結(jié)合的能力,并可能導(dǎo)致SPE方法的上樣和洗滌步驟出現(xiàn)突破。緩慢而穩(wěn)定的樣品流贏得了比賽。以流速為目標(biāo),小于或等于每秒 1 滴(~ 1 毫升/分鐘)。

8. 松散包裝與復(fù)合包裝

松散堆積的材料會(huì)給吸附劑床帶來(lái)許多問(wèn)題,包括竄道、壓縮、排空以及由于松散填充后頂部熔塊缺乏壓縮而導(dǎo)致的床重量與床高比差異不一致(圖 1)。所有這些因素都會(huì)對(duì)測(cè)試的回收率和可重復(fù)性產(chǎn)生負(fù)面影響??紤]像Microlute® CP系列這樣的復(fù)合產(chǎn)品,這些產(chǎn)品旨在消除這些問(wèn)題,提高SPE方法的回收率和重復(fù)性。

                                             


9. 洗脫前干燥SPE樹脂

二氧化硅在干燥時(shí)非常容易發(fā)生固相塌陷。在完成SPE程序的最后清洗步驟之前,任何時(shí)候都不要讓二氧化硅基樹脂變干 - 在加載步驟中尤其如此。這通過(guò)限制分析物和鍵合相之間可能的相互作用來(lái)防止回收率降低。

以下小貼士適用于聚合物樹脂和二氧化硅樹脂:

• 執(zhí)行洗滌步驟后,確保使用真空或正壓干燥樹脂,直到樹脂干燥(我們建議施加正壓/真空至少 3 分鐘)或直到看不到洗滌溶劑。

• 如果您的方法需要干燥和復(fù)溶步驟,則干燥樹脂減少干燥時(shí)間,大多數(shù)洗滌溶劑中都存在水,這比大多數(shù)有機(jī)溶劑更難蒸發(fā)。

• 如果您的方法不需要干燥步驟,則在洗滌步驟后不干燥 SPE 樹脂會(huì)導(dǎo)致注射液的最終溶液濃度降低,從而導(dǎo)致靈敏度降低。

10. 最佳干燥

確保您的干燥方法足夠劇烈,以明顯擾亂洗脫溶劑的表面,但又不能太劇烈,以免導(dǎo)致溶液從孔中排出的可能性,因?yàn)檫@將導(dǎo)致嚴(yán)重的RSD%和回收率差異。這可能非常困難,因?yàn)槿軇┧皆诟稍镞^(guò)程中會(huì)發(fā)生變化。

為了克服這個(gè)問(wèn)題,請(qǐng)使用可編程或自動(dòng)調(diào)節(jié)的蒸發(fā)器以實(shí)現(xiàn)高效的溶劑蒸發(fā),例如Porvair Sciences Ultravap®系列蒸發(fā)器,該蒸發(fā)器可以在過(guò)程的所有階段優(yōu)化干燥,而不會(huì)產(chǎn)生任何樣品污染的風(fēng)險(xiǎn)。

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